显微镜观察用细胞样品如何保存?

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日期:2017-8-28 阅读 483 次

鼎盛集团投注  显微镜固定的具体方法可参考常电镜样品制备方法,徕卡显微镜免疫电镜和电镜细胞化学各章。显微镜所谓包裹(Encapsulation),显微镜就是利用某些大分子溶液浸透样品的过程.这些大分子不会穿过细胞膜而进入细胞,只能占据细胞间的空隙,显微镜包裹的目的也是为了防止超薄切片在制备过程中被破坏。这一步对于显微镜分散的细胞样品尤其必要。

鼎盛集团投注  显微镜用于包裹的物质有明胶,白蛋白,甲基纤维素、蔗糖等。下面以白蛋白为例,说明其具体方法.1.在一聚乙烯塑料管中加入牛血清白蛋白(BSA),BSA溶于0. lmol/L的磷酸缓冲液中,pH7. 2,浓度为10%^-20%;2.徕卡显微镜将经固定的组织块表面的残余液体用滤纸吸干,并迅速投入BSA中,3.显微镜一面振动塑料管,一面向其中逐滴加入25%的戊二醛,使管中戊二醛的最终浓度为2. 5 %;4.在上述条件下,BSA约在半分钟左右即可被戊二醛交连(聚合),显微镜用保险刀片将塑料管壁切除。把聚合的BSA切成小方块,使其大小略大于包埋于其中的组织块。如果徕卡显微镜样品是游离细胞,可按下述步骤包裹:

  1.将BSA加入一离心管内,显微镜浓度与上同;

鼎盛集团投注  2.把经过固定的细胞转入离心管;

鼎盛集团投注  3.在冷冻离心机上离心10分钟,800g, 40C;

  4。去掉上清,数码显微镜在管底沉淀上加一滴用0. lmol/L磷酸缓冲液配制的10%的戊二醛,使残余的BSA交连;

  5.用针把聚合后的团块拨起,切成小块。

鼎盛集团投注  为防止显微镜冷冻时生成大的冰晶而使结构破坏,组织需经冷冻保护剂处理,常用的冷冻保护剂有甘油(30%), DMSO (20%)和蔗糖(2.3mol/L),均用缓冲液配制,显微镜组织在冷冻保护剂中浸泡的时间为0.5-1小时(室温)或过液((400)

  为防止大的冰晶产生,数码显微镜除使用冷冻保护剂外,应采取速冻的办法,其基本要求与具体作法和冷冻断裂与蚀刻时相同,即将经数码显微镜冷冻保护的组织块投入用液氮冷却的氛里昂12内.


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